本作主人公“杀手先生”（樱井孝宏 配音）是一名职业杀手，只要接到委托就什么都杀，甚至是自己的父母或者是小学生的暑假作业。他有个弟子，是父母双亡的小学生，因为崇拜杀手先生而拜其为师。登场人物还有要向杀手先生报杀父之仇的17岁巨乳美少女、与杀手先生有多次近距离接触的警长、一条名为“五郎”的警犬。本动画每集篇幅为3分钟，充满了大量令人捧腹的冷笑话，可以说是以杀手先生为中心的冷笑话集锦。杀手先生虽然长相帅气，为人冷酷，实际上是个冷面笑匠，与美少女、警长等角色的接触中，产生各种超乎意料的搞笑桥段。
梶原岳人 小林裕介 中井和哉 铃村健一 上条沙惠子 市道真央 悠木碧 八代拓 阪口大助 楠大典 兴津和幸 日野聪 宝龟克寿 土师孝也 鸟海浩辅 小西克幸 长岛雄一 小野大辅 古川慎 坂田将吾 Lynn 河西健吾 大原沙耶香 金元寿子 宫野真守 前野智昭 赤尾光 坂本真绫 内山夕实 钉宫理惠 松冈祯丞 乃村健次 千叶进步 岛袋美由利 大久保瑠美 小林亲弘 青山穰 安元洋贵 日笠阳子 关智一 津田健次郎 樱井孝宏 朝井彩加 小野友树 伊藤健太郎 速水奖
大川透 三宅健太 岛崎信长 代永翼 雪野五月 津田健次郎 宫田幸季 托德·哈伯空 花江夏树 坂本千夏 竹内顺子 樱井孝宏 神谷浩史 山寺宏一 三石琴乃 佐藤利奈 伊藤静 野岛健儿 藤井雪代 林原惠美 石田彰 山口由里子 立木文彦 子安武人 长泽美树 麦人 竹中直人 高山南 山崎和佳奈 小山力也 日高法子 森川智之 池田秀一 梁田清之 松井菜樱子 飞田展男 松本和香子 齐藤贵美子 高桥广树 名塚佳织 稻田彻 长岛雄一 柴田秀胜 野泽雅子 楠大典 桧山修之 小西克幸 大塚芳忠 银河万丈 大塚明夫 渡边久美子
高山南 山口胜平 山崎和佳奈 小山力也 林原惠美 岩居由希子 高木涉 大谷育江 绪方贤一 富田耕生 松井菜樱子 榊原良子 宝龟克寿 野上尤加奈 矶部弘 咲野俊介 石冢运升 茶风林 泽田敏子 皆口裕子 大川透 陶山章央 楠大典 柴田秀胜 三户耕三 梅津秀行 松本大 鸟海胜美 武田晶子 仓田雅世 小田敏充 知英 荣仓奈奈
栗田贯一 小林清志 增山江威子 井上真树夫 纳谷悟朗 津嘉山正种 筱原惠美 内海贤二 速水奖 天田益男 绪方贤一 岩永哲哉 阪脩 峰惠研 秋元羊介 塚田正昭 大川透 中博史 长岛雄一 青山穰
大川透 铃木达央 榎木淳弥 小野大辅 野岛健儿 中村悠一 高桥伸也 福岛润 长绳麻理亚 梶裕贵 小西克幸 野濑育二 小野贤章 鸟海浩辅 千本木彩花 滨野大辉 相马康一 手冢弘道 千叶翔也 山下大辉 阪口大助 天崎滉平 诹访部顺一 藤真秀 小松史法 齐藤次郎 石川英郎 木岛隆一 福西胜也 高坂笃志 井上雄贵 高野麻美 Namiko Morimoto
兴津和幸 雪野五月 坂本真绫 大原沙耶香 中务贵幸 高桥李依 新谷真弓 兴梠里美 矢作纱友里 浅野真澄 泽城美雪 植田佳奈 井泽诗织 东山奈央 立花慎之介 山崎巧 藤田咲 岛村侑 古城门志帆 伊东美弥子 山村响 松本保典 小林裕介 日野聪 千菅春香 木下浩之 真殿光昭 松浦爱弓 牧口真幸 榊原良子 矢部雅史 筱原惠美 仪武祐子 佳村遥 甲斐田雪 水野理纱 村田太志 阿部敦 阪脩 田丸笃志 清水香里 横尾麻里 泽田敏子 高桥孝治 矶部花凛 佐古真弓 新名彩乃 保住有哉 桥本结
岛村侑 浅野真澄 山村响 泽城美雪 立花慎之介 东山奈央 古城门志帆 新谷真弓 甲斐田幸 榊原良子 真殿光昭 日野聪 井泽诗织 伊东美弥子 中务贵幸 松本保典 仪武祐子 松浦爱弓 大原沙耶香 兴津和幸 木下浩之 筱原惠美 佳村遥 水野理纱 桥本结 新名彩乃 安艺启子 阿部敦 矢作纱友里 田丸笃志 村田太志 泽田敏子 栗田舞 千菅春香 矢部雅史 植田佳奈 小林裕介 山崎巧 佐古真弓 阪脩 兴梠里美 坂本真绫 牧口真幸 藤田咲 雪野五月 清水香里
梶裕贵 石川由依 井上麻里奈 下野纮 小林优 三上枝织 藤田咲 细谷佳正 桥诘知久 谷山纪章 岛村侑 津田健次郎 朴璐美 小野大辅 神谷浩史 子安武人
金元寿子 佐藤利奈 茅原实里 梶裕贵 花泽香菜 悠木碧 户松遥 井口裕香 伊濑茉莉也 藤田咲 野水伊织 南条爱乃 伊藤加奈惠 桑谷夏子 后藤邑子 大龟明日香 寺本来可 桥本舞
小林千晃 上村祐翔 高口公介 Satoshi Yamaguchi
柿原徹也 前野智昭 増田俊樹 三木眞一郎 寺島惇太 斉藤壮馬 畠中祐 八代拓 五十嵐雅 永塚拓馬 内田雄馬 蒼井翔太 武内駿輔
梶裕贵 石川由依 井上麻里奈 神谷浩史 朴璐美
神谷浩史 小野大辅 岛崎信长 岩田光央 爱河里花子 茅野爱衣 田村由香里 日野聪 花江夏树 森久保祥太郎 前野智昭 内田真礼 细谷佳正 村田太志 松冈祯丞 野岛健儿 松风雅也
高山南 山口胜平 山崎和佳奈 小山力也 堀川亮 松井菜樱子 宫村优子 林原惠美 绪方贤一 岩居由希子 高木涉 大谷育江 永井一郎 石冢运升 大桥望美 优木真央美 池田知聪 石毛佐和 真地勇志 大友龙三郎 天田益男 阪口周平 松本大 三宅健太 大川透 谷山纪章 石井真 伊藤静 本多知惠子 大本真基子 井原启介 大西健晴 小田敏充 上野亮 中田浩二 大矢兼臣 小山武宏 小川真司 茶风林 井上和彦 汤屋敦子 千叶一伸 广濑正志 野田圭一
福山润 内田真礼 赤崎千夏 浅仓杏美 上坂堇 长妻树里 仙台惠理 大塚芳忠 保志总一朗 岩男润子 福原香织 天野由梨 冲佳苗 井上喜久子 设乐麻美 山冈百合
岛崎信长 井上麻里奈 富樫美铃 竹达彩奈 野水伊织 真田麻美 内田真礼 布里德卡特·塞拉·惠美 茅原实里 雨宫天
安济知佳 若山诗音 小清水亚美 久野美咲 榊孝辅
福山潤 石川界人 釘宮理恵 赤羽根健治 伊藤静 杉田智和
森川智之 稻田彻 市之濑加那 谷山纪章 小林裕介 伊藤彩沙 菱川花菜 美坂朱音
绿川光 国府田麻理子 冬马由美
未知
演员：小林千晃 上村祐翔 高口公介 Satoshi Yamaguchi
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演员：柿原徹也 前野智昭 増田俊樹 三木眞一郎 寺島惇太 斉藤壮馬 畠中祐 八代拓 五十嵐雅 永塚拓馬 内田雄馬 蒼井翔太 武内駿輔
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演员：梶裕贵 石川由依 井上麻里奈 神谷浩史 朴璐美
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